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适用于蛋白质鉴定和基因表达分析的体外自相容性响应柑橘品种,Banpeiyu和Huuganatsu

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  • 1宫崎骏大学农业与工程跨学科研究生院,1-1,学园花园大西,宫崎骏889-2192
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自交不亲和是高等植物促进异交和防止自花受精的重要机制。“Banpeiyu”(柑橘最大值)和“天象”(柑橘tamurana),其中两个柑橘栽培品种在日本Kyusyu,显示出杂草类Si。在这项研究中,我们使用了柑橘成熟花粉培养体系和花柱粗蛋白提取物模拟‘板培玉’花粉管的亲和(C)和SI反应。采用纳米液相色谱-质谱联用技术(nano-LC-MS)分析了C-和si样处理下花粉管中蛋白质的变化;在C-和si -样处理中分别鉴定出14和27个蛋白。本研究在‘板培玉’和‘天野松’花粉管中选取了一些在si样处理中特别普遍的候选基因,分析了它们在C和si样处理中表达水平的变化。的表达水平铜/锌超氧化物歧化酶Cu / Zn Sod),锰SOD.锰超氧化物歧化酶),过氧化氢酶),半胱氨酸蛋白酶CYP)增加。我们利用荧光探针观察了C-和si -类处理后‘板培玉’和‘雨野松’花粉管中活性氧(ROS)水平的变化,发现2小时si -类处理诱导了两个品种花粉管中ROS水平的升高。这些结果表明,ROS的增加可能是SI反应的关键现象之一柑橘基因表达的变化是对ROS产生的反应。

抽象的

自交不亲和是高等植物促进异交和防止自花受精的重要机制。“Banpeiyu”(柑橘最大值)和“天象”(柑橘tamurana),其中两个柑橘栽培品种在日本Kyusyu,显示出杂草类Si。在这项研究中,我们使用了柑橘成熟花粉培养体系和花柱粗蛋白提取物模拟‘板培玉’花粉管的亲和(C)和SI反应。采用纳米液相色谱-质谱联用技术(nano-LC-MS)分析了C-和si样处理下花粉管中蛋白质的变化;在C-和si -样处理中分别鉴定出14和27个蛋白。本研究在‘板培玉’和‘天野松’花粉管中选取了一些在si样处理中特别普遍的候选基因,分析了它们在C和si样处理中表达水平的变化。的表达水平铜/锌超氧化物歧化酶Cu / Zn Sod),锰SOD.锰超氧化物歧化酶),过氧化氢酶),半胱氨酸蛋白酶CYP)增加。我们利用荧光探针观察了C-和si -类处理后‘板培玉’和‘雨野松’花粉管中活性氧(ROS)水平的变化,发现2小时si -类处理诱导了两个品种花粉管中ROS水平的升高。这些结果表明,ROS的增加可能是SI反应的关键现象之一柑橘基因表达的变化是对ROS产生的反应。

被子植物的自交不亲和是通过抑制花粉管生长来阻止自花受精和促进异花授粉的一种机制。RNase-mediated gametophytic SI (GSI)是一种通过雌蕊和花粉的s基因座编码的蛋白质相互作用识别和降解自花授粉的系统。Foote等,1994平冢等,2012赖等人,2002年李等人,1994Murfett等,1994年惠勒等人,2009).

近年来,一些研究对暴露于SI反应的花粉管的胞质改变进行了研究。活性氧是一种有效的信号分子,在花粉管中容易受到SI反应的影响罂粟花rhoeasWilkins et al., 2011) 和Pyrus pyrifoliaWang et al., 2010).ROS的增加被认为是应激反应,随后Ca的内流2+检测(Rentel和Knight, 2004年).过氧亚硝酸盐是一种强氧化剂和硝化剂,在授粉过程中产生齐墩果欧洲公司,增加SI花粉管中的蛋白质硝化作用(Serrano等人,2011年).研究表明,SI反应引起的过量ROS毒性可引发级联反应,最终导致不亲和花粉管细胞程序性死亡。PCD是一个重要的过程,选择性地消除不需要或受损细胞的发育和组织稳态(福克斯和斯特勒,2011年).细胞凋亡是PCD的一种形式,细胞色素c的重新定位被认为是哺乳动物PCD过程的开始;细胞色素c在凋亡小体中作为前蛋白酶的激活物(灰色,2004).虽然caspase-3仅存在于动物PCD中,但caspase-3-like/DEVDase在SI反应中表现出DEVD (Asp-Glu-Val-Asp)特异性p . rhoeas花粉管(Thomas和Franklin-Tong, 2004年).在花粉管中,已经观察到线粒体塌陷,DNA,ROS突发和细胞骨架解聚的降解,这些现象是PCD的常见特征(盖特曼等人,2000年Roldán等,2012王等,2009aWilkins et al., 2011).

柑橘是典型的GSI植物之一,从柑橘品种中克隆了S-RNase同源物,与茄科(茄科)(Miao et al., 2011).但是,尚未确认这些同源物是否具有GSI的功能。蛋白质组学和基因组学分析已被广泛应用于识别SI机制柑橘Distefano等(2009)比较了柑橘自花授粉和不自花授粉的花柱和柱头的转录谱(柑橘克莱门蒂娜).虽然在SI ' Comune '和突变的自亲和' Monreal '之间鉴定了96个ungenes,但是,它们之间的相互作用是相互影响的年代基因未检测到。在' Hyuganatsu '中,基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱法鉴定了雌蕊中的蛋白质表达,表明雌蕊在开花前3 - 5 d从自相容转变为SI (内田等,2012b).而且,用于调查柑橘建立了离体花粉培养体系(内田等,2012a)和使用花柱粗蛋白提取物处理的体外si样反应体系(李等人,2015).还证明了智捷艺术蛋白质提取物在苹果花粉管中诱导Si反应,以及体外纯化的S-RNase蛋白(孟等,2014).

在本研究中,我们使用了强GSI柑橘栽培品种板培玉柚和与之相关的机种栽培品种柑橘柚子,用于研究花粉管中的SI反应。这些是日本九州的重要经济水果品种,自花授粉的种子很少(Wakana等人,2004年山本等人,2006年).为了检测花粉管中的SI相关蛋白,我们利用纳米lc - ms技术获得了‘板培玉’花粉管中的蛋白表达谱,并对C处理和SI处理之间的蛋白进行了鉴定。对参与SI反应的基因的转录变化也进行了分析。

材料和方法

植物材料。

花期前一天,分别采有“板培余”(2013年、2014年春季)、“雨野松”(2014年春季)、“Hassaku”(2013年、2014年春季)的花蕾。柑橘hassaku)(于2013年春季采集)采自日本宫崎骏大学实验田中生长的成熟树木。用镊子将“板培玉”和“御甘露”的花药分离,用硅胶在25℃培养箱中干燥过夜,直至花药开裂。成熟花粉粒在−40℃保存至使用。从新鲜雌蕊中分离出花柱,并尽快进行蛋白提取。

智捷艺术粗蛋白提取物制剂。

“Banpeiyu”,“Hassaku”和“HUNGANATSU”的款式准备使用如下所述的提取缓冲液分离粗蛋白提取物李等人。(2015).所有提取操作均在冰上进行,分离出的蛋白溶液分成100 μ l份,在−80°C下保存至使用。粗蛋白提取液的浓度由蛋白测定染料试剂浓缩(Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA)测定。

花粉培养和C-和si样处理的纳米lc - ms分析。

对板培玉花粉粒进行了培养柑橘成熟的花粉培养系统内田等(2012a),在25°C黑暗中初步培养4小时。在培养液中加入“Hassaku”和“板培玉”花柱粗蛋白提取物,达到50 μg·mL−1最终浓度,分别作为C-或si样处理。在培养基中加入蛋白提取缓冲液作为对照。处理2 h后,用玻璃毛细管取100根发育正常的花粉管平野和星野(2010),并转移到新的清洁管中。将所有花粉管重悬于75μL含有10米的提取缓冲液中戴斯。莱纳姆:二硫苏糖醇(DTT), 50米pH 8.0 TRIS基地,10米乙二胺四乙酸,0.5% 3-[(3-胆胺丙基)二甲基胺基]-1-丙磺酸盐,0.5 m苯甲酰氯氟乙烯(Sigma,ST.LOUIS,MO)。通过涡流处理与微玻璃珠混合的样品(直径为425至600μm),涡旋30 s,然后在冰浴中保持30秒;这个过程重复了五次。然后用2-D清理套件(GE Healthcare Life Scients,Little Chalfont,UK)纯化粗蛋白质溶液。将纯化的蛋白质样品溶于50μl10μm德勤和25米NH4HCO3..然后,用含55 m的溶液对样品进行还原烷基化处理碘乙酰胺(Sigma)和25米NH4HCO3.在室温黑暗中保存30分钟。最后加入50 μL胰蛋白酶[10 ng·mL]处理−1(Sigma)]在37°C下保存12小时,用甲酸稀释至最终浓度为0.1%。

使用纳米LC-MS(LTQ orbitrap; Thermo Fisher Scientific,Waltham,MA)和Spectra进行分析蛋白质样品,并由Extract_MSN.exe计划(BioWorks 3.2软件; Thermo Fishific)出口。利用胰蛋白酶自动蛋白分解产物内校准提取的光谱。通过将大众清单与蛋白质清单进行比较来实现蛋白质鉴定柑橘在NCBI数据库使用吉祥物软件(版本2.2;Matrix Science,波士顿,马萨诸塞州)。对照中检测到的蛋白在C-和si -样处理中均被排除在外。

SQRT-PCR和QRT-PCR相关与Si样响应相关的候选基因的表达分析。

将‘板培玉’和‘雨甘松’的花粉粒重悬在叶片中柑橘成熟花粉培养系统,密度≈106在黑暗中在25°C时晶粒/ ml初始培养4小时。“Banpeiyu”的花粉管接触到“Banpeiyu”或“Huuganatsu”智衣粗蛋白质提取物,分别为Si-或C样处理;反之亦然,'Huuganatsu'花粉管分别接触到“Banpeiyu”或“Huuganatsu”的智华柱粗蛋白提取物,分别为C-或Si样处理。

分别在0、1、2和4 h的C-和si -样处理后采集了‘板培玉’和‘天野松’的花粉管。总RNA用RNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Venlo, Netherlands)提取,1 μg总RNA用Superscript III Kit (Life Technologies, Carlsbad, CA)和Oligo(dT)合成cDNA。20.引物。推测的si相关基因的引物序列柑橘, 包含Cu / Zn Sod(AB981053),铁SOD.Fe Sod.(AB981054)),锰超氧化物歧化酶(AB981055),(AB981056),CYP(AB981057),l-galactose-1-phosphate磷酸酶GPP(AB981061)],miraculin-like蛋白1MLP-1(AB981059)],和MLP-3(AB981060),采用半定量反转录聚合酶链反应(SqRT-PCR)分析4-h C-和si -样处理后基因的表达情况。引物序列及SqRT-PCR程序列于表1柑橘既定的表达了肌动蛋白板培玉基因(accession no.;GU911361)和Hyuganatsu (accession no. GU911361)。XM_006432422)作为内部控制。Real-time qRT-PCR采用CFX manager Real-time PCR检测系统(Bio-Rad Laboratories), SYBR Fast qRT-PCR Kit (KapaBiosystems, Wilmington, MA)和相应引物(表2.).使用CFX管理软件(Bio-Rad Laboratories)对数据进行分析−△△CT方法。花粉管处理试验和表达分析分别重复3次进行统计分析(杜克倍数变异试验)。

表1。

半定量反转录PCR (SqRT-PCR)的引物和PCR程序。

表1。
表2。

实时定量PCR (qRT-PCR)的引物和PCR程序。

表2。

si样处理后花粉管的ROS分析。

将‘板培玉’和‘天松’的花粉粒在25℃下预培养4 h柑橘在黑暗中成熟的花粉培养系统。CM-H2DCFDA(Life Technologies)用于ROS可视化。将探针稀释成无水二甲基亚甲醚以制备5-μm(cm-h2DCFDA)的工作方案。将萌发的花粉管与探针在黑暗中孵育30 min,将探针装入花粉管中。标记后丢弃探针液,用培养基冲洗花粉管3次。然后用C-和si样处理花粉管2 h,用共聚焦激光显微镜(LSM700;蔡司(Carl Zeiss),耶拿,德国)。

结果与讨论

在本研究中,我们将这种SI-like响应系统应用于si相关蛋白的分子鉴定柑橘花粉管。为了检测花粉管中SI相关蛋白,我们从C和SI花粉管粗提物处理的‘板培玉’花粉管中分离出蛋白质,并通过纳米lc - ms分析得到花粉管蛋白的肽谱数据。搜索光谱数据的结果柑橘数据库,与对照相比,在C-和Si样处理中观察到不同的蛋白质表达,我们成功地确定了由C样治疗诱导的14个推定蛋白质(表3)和由类si处理诱导的27种推定蛋白(表4.).根据与生物过程和分子功能有关的基因本体论术语对这些蛋白质进行了分类。在c样处理中,代谢过程(85.7%)是生物过程中最常见的一类,其次是运输过程和糖酵解过程,各占7.15%。在分子功能方面,催化活性最高,占78.7%;水解酶活性、脂质结合和钙离子结合分别为7.1% (图1一个).在类si处理的生物过程类别中,代谢过程占85.2%,其次是应激反应过程占11.1%,糖酵解过程占其余。在分子功能类中,催化活性也是最常见的活性,占74.1%,其次是水解酶活性(14.8%);其余部分平分为钙离子结合蛋白、三磷酸腺苷结合蛋白和致病相关蛋白(图1 b).在离体处理中,我们在花粉培养基中添加了花柱粗蛋白而不是纯化的s蛋白,因此我们认为两种处理中检测到的蛋白,如代谢过程中的蛋白,与SI反应无关。由于生物过程范畴的“应激反应过程”和分子功能范畴的“致病相关蛋白”仅在类si处理中观察到(图1 b),我们集中研究这些蛋白作为si相关蛋白的候选蛋白。

表3。

蛋白鉴定结果柑橘最大值板培玉花粉管经亲和(C)样处理。

表3。
表4。

蛋白鉴定结果柑橘最大值板培玉花粉管经自交不亲和处理。

表4。
图1所示。
图1所示。

通过纳米液相色谱-质谱法对蛋白质进行分类柑橘最大值'Banpeiyu'花粉管兼容后(一个)和自不相容的(B)治疗。蛋白质分类是根据与生物过程和分子功能有关的基因本体论术语进行的。

引文:美国园艺科学学会杂志。bet188提款188bet金宝搏备用Soc。长的矮。科学。140年,4;10.21273 / jashs.140.4.339

我们选择了8个基因,包括Cu / Zn SodFe Sod.锰超氧化物歧化酶CYPGPPMLP-1,MLP-3,并通过SqRT-PCR (图2).基因,Cu / Zn SodFe Sod.锰超氧化物歧化酶CYP,GPP,在花粉管中均有表达。另一方面,我们不能检测的表达MLP-1MLP-3在“半条命”和“天穹”中。因此,六个基因,Cu / Zn SodFe Sod.锰超氧化物歧化酶CYP,GPP选择进一步调查。通过QRT-PCR分析了在C-或Si的处理期间花粉管中的表达水平。'banpeiyu'的表达方式(图3)和“天象”(图3 b)的表达水平也有相似的趋势Cu / Zn Sod锰超氧化物歧化酶,CYPsi样处理2 ~ 4 h后,除c样处理和对照外,均显著高于c样处理和对照锰超氧化物歧化酶CYP在“板培玉”中进行2 h si样处理。在锰超氧化物歧化酶4-h C-like处理后的表达水平也高于对照处理。的表达水平Fe Sod.在“Banpeiyu”和“Huuganatsu”的花粉管中显示出在4-H C-和Si样的处理中没有显着变化。虽然GPP在“HUUGANATSU”的表达水平,在“HUUGANATSU”的含量高于C样治疗和对照,从2至4小时没有显着差异。

图2所示。
图2所示。

候选基因表达,铜/锌超氧化物歧化酶Cu / Zn Sod),铁SOD.Fe Sod.),锰SOD.锰超氧化物歧化酶),过氧化氢酶),半胱氨酸蛋白酶CYP),l-galactose-1-phosphate磷酸酶GPP),miraculin-like蛋白1MLP-1),miraculin-like蛋白质3MLP-3),与自我不相容(SI)反应有关柑橘最大值'banpeiyu'和c . tamurana亲和(C)样和si样处理4 h后的‘Hyuganatsu’花粉管。采用半定量逆转录PCR分析基因表达。

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图3所示。
图3所示。

基因表达在相容(c) - 般的和自我不相容(Si)的处理期间变化。花粉管柑橘最大值“Banpeiyu”(一个) 和柑橘tamurana“Hyuganatsu”(B)经C-或si -样处理0-4 h后,利用实时荧光定量PCR分析基因在花粉管中的表达铜/锌超氧化物歧化酶Cu / Zn Sod),铁SOD.Fe Sod.),锰SOD.锰超氧化物歧化酶),过氧化氢酶),半胱氨酸蛋白酶CYP),l-galactose-1-phosphate磷酸酶GPP).数值为三个生物重复的平均值±sd在每个时间点(n= 3).不同的字母代表在5%水平上的显著差异,由Tukey多量程检验(ns=无意义的区别)。

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在候选基因中Cu / Zn Sod,锰超氧化物歧化酶在‘板培玉’和‘天纳津’的花粉管中,si类处理(图3.).SODS(EC1.15.1.1)是一系列金属酶,通常存在于植物派和繁殖植物组织中,作为保护细胞免受氧化应激的保存,并保持ROS生成和降解之间的平衡(DelRío等,2002年王等,2009b).猫作为抗氧化酶,可以有效地转化H.2O2在H2O, O2sod的反应。因此,推测花粉管中的ROS可能与si样反应有关。我们研究了‘板培玉’和‘天野松’花粉管中c和si样处理后ROS水平的变化。我们用活性氧探针CM-H检测其水平2DCFDA。“Banpeiyu”和“Huuganatsu”的花粉管中的水平在控制和C样治疗中非常低(图4.).另一方面,经过si样处理的花粉管中,‘板培玉’和‘天松’的花粉管均表现出强烈的荧光信号(图4.).这些结果表明,ROS生产未通过向培养基添加智能柱粗蛋白来诱导,但是由特定蛋白质之间的反应以及花粉管中的某种因子引起的。

图4所示。
图4所示。

2 h亲和(C)或自不亲和(SI)处理对紫花苜蓿活性氧水平的影响柑橘最大值“Banpeiyu”(一个) 和柑橘tamurana“Hyuganatsu”(B)花粉管;比例尺= 200 μm。

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ROS是植物中重要的信号分子,参与细胞信号网络(Gadjev等人,2008年).花粉管中p . rhoeas在美国,有报道称,Ca后的SI反应可诱导ROS增加2+振荡以及在此后的不久检测到花粉管细胞骨骼中的肌动蛋白的解聚(Wilkins et al., 2011).在' Banpeiyu '和' Hyuganatsu '中,ROS的增加也被认为是si样反应的关键现象之一,并且表达增加草皮S将是对过度ROS生成的反馈响应。除了草皮S表示的表达水平CYPsi样处理后增加(图3.).CYP与应激反应有关(伯努等人,2008年Chen et al., 2010),而CYP的高表达被认为是PCD早期的一个指标(Kuriyama和Fukuda,2002年).由于ROS被认为是PCD的关键诱导因子(De Pinto等,2012),这可能是在‘板培玉’和‘御甘松’花粉管中sii样处理诱导的ROS级联反应是PCD过程的触发。

年代'Banpeiyu'的基因型已被确定为年代1年代2通过大量的授粉实验,和年代'hassaku'的基因型已被估计为年代4年代5Kim等人,2011年).因此,在本研究中,Si相关蛋白质的候选者源自Si-and C样处理与不同的差异不同的蛋白质年代基因型。的年代‘Hyuganatsu’基因型为年代1年代并且被称为不包括年代2等位基因(Kim等人,2011年).在表达分析中,“板培玉”的c类设置(年代1年代2)和“天象”(年代1年代)被解释为半相容基因型。基因表达草皮年代,,CYPC-和si -样处理间差异显著(图3.),提示体外si样系统将适用于年代基因分型分析柑橘

总之,我们通过组合体外Si样响应系统和纳米LC-MS分析成功地鉴定了与SI样响应相关的蛋白质,并揭示了花粉管中的ROS产生是一种类似的Si样响应。基因表达草皮通过Si样的治疗在花粉管中增加,也表明氧化平衡柑橘si样处理破坏花粉管。澄清SI的机制柑橘,需要进一步研究花粉管中的Si反应。此外,需要鉴定SI的女性和男性决定簇。Si样系统具有巨大的潜力,以便进展对SI反应的理解。

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  • 王,C。吴,J。徐,G。高,y。陈,G。吴,J。吴,H。张,年代。2010S-RNase破坏了尖端局部化的活性氧物质,并在不相容的花粉管中诱导核DNA降解Pyrus pyrifoliaJ. Cell SCI。12343014309

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  • 王,C。徐,G。江,X。陈,G。吴,J。吴,H。张,年代。2009年,一个S-RNase在不亲和的花粉管中引起线粒体改变和DNA降解Pyrus pyrifolia在体外植物J。57220229

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  • 王,J。刘,X。余先生,G。2009 b烟草花粉中超氧化物歧化酶同工酶的鉴定前面。医学杂志。中国4442445

  • 惠勒M.J.格拉夫,B.H.Hadjiosif,N。佩里,智慧化普特n。奥斯曼,K。Vatovec,年代。哈珀一个。富兰克林,足球俱乐部Franklin-Tong,V.E.2009花粉自交不亲和的鉴定罂粟花rhoeas自然459992995

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  • 威尔金斯,·班克罗夫特,J。博世,M。老年男性,J。司木露,N。Franklin-Tong,V.E.2011活性氧和一氧化氮介导肌动蛋白重组和程序性细胞死亡在自交不亲和反应罂粟植物杂志。156404416

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  • 山本,M。库博,T。Tominaga,年代。2006各种自交不亲和性柑橘加入j .日本。Soc。长的矮。科学。75372378

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贡献者的笔记

这项研究得到了科学研究补助金(KAKENHI no.)的支持。25660029),来自日本科学促进协会(jsp)。

相应的作者。电子邮件:hkuni@cc.miyazaki-u.ac.jp

  • Classification of the proteins from nano-liquid chromatography\u2013mass spectrometry results in Citrus maxima<\/em> \u2018Banpeiyu\u2019 pollen tubes after compatible-like (A<\/strong>) and self-incompatible-like (B<\/strong>) treatments. Protein classification is according to gene ontology terms related to biological process and molecular function.<\/p><\/caption>","header":"","imageUris":["/view/journals/jashs/140/4/full-339fig1.jpeg"],"id":"F1_0"}],"id":"F1"}" aria-selected="false" role="option" data-menu-item="list-id-1914d794-4bcb-4ed4-9c46-d45697dbf0a6" class="ListItem ListItem--disableGutters ListItem--divider">

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    通过纳米液相色谱-质谱法对蛋白质进行分类柑橘最大值'Banpeiyu'花粉管兼容后(一个)和自不相容的(B)治疗。蛋白质分类是根据与生物过程和分子功能有关的基因本体论术语进行的。

  • Gene expression of candidates, copper/zinc superoxide dismutase<\/em> (Cu/Zn SOD<\/em>), iron SOD<\/em> (Fe SOD<\/em>), manganese SOD<\/em> (Mn SOD<\/em>), catalase<\/em> (CAT<\/em>), cysteine protease<\/em> (CYP<\/em>), l<\/em><\/span>-galactose-1-phosphate phosphatase<\/em> (GPP<\/em>), miraculin-like protein-1<\/em> (MLP-1<\/em>), and miraculin-like protein-3<\/em> (MLP-3<\/em>), related to self-incompatible (SI) response in Citrus maxima<\/em> \u2018Banpeiyu\u2019 and C. tamurana<\/em> \u2018Hyuganatsu\u2019 pollen tubes after 4 h of compatible (C)-like and SI-like treatments. The gene expressions were analyzed by semiquantitative reverse transcription PCR.<\/p><\/caption>","header":"","imageUris":["/view/journals/jashs/140/4/full-339fig2.jpeg"],"id":"F2_0"}],"id":"F2"}" aria-selected="false" role="option" data-menu-item="list-id-1914d794-4bcb-4ed4-9c46-d45697dbf0a6" class="ListItem ListItem--disableGutters ListItem--divider">

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    候选基因表达,铜/锌超氧化物歧化酶Cu / Zn Sod),铁SOD.Fe Sod.),锰SOD.锰超氧化物歧化酶),过氧化氢酶),半胱氨酸蛋白酶CYP),l-galactose-1-phosphate磷酸酶GPP),miraculin-like蛋白1MLP-1),miraculin-like蛋白质3MLP-3),与自我不相容(SI)反应有关柑橘最大值'banpeiyu'和c . tamurana亲和(C)样和si样处理4 h后的‘Hyuganatsu’花粉管。采用半定量逆转录PCR分析基因表达。

  • Gene expression changes during compatible (C)-like and self-incompatible (SI)-like treatments. The pollen tubes of Citrus maxima<\/em> \u2018Banpeiyu\u2019 (A<\/strong>) and Citrus tamurana<\/em> \u2018Hyuganatsu\u2019 (B<\/strong>) were processed with C- or SI-like treatment for 0\u20134 h, and then the gene expression in the pollen tubes were analyzed by real-time quantitative PCR for Copper/zinc superoxide dismutase<\/em> (Cu/Zn SOD<\/em>), iron SOD<\/em> (Fe SOD<\/em>), manganese SOD<\/em> (Mn SOD<\/em>), catalase<\/em> (CAT<\/em>), cysteine protease<\/em> (CYP<\/em>), and l<\/em><\/span>-galactose-1-phosphate phosphatase<\/em> (GPP<\/em>). Values are the mean of three biological replicates ±sd<\/span> for each timing (n<\/em> = 3). Different letters represent significant differences at 5% level as determined by Tukey\u2019s multiple range test (ns<\/span> = nonsignificant difference).<\/p><\/caption>","header":"","imageUris":["/view/journals/jashs/140/4/full-339fig3.jpeg"],"id":"F3_0"}],"id":"F3"}" aria-selected="false" role="option" data-menu-item="list-id-1914d794-4bcb-4ed4-9c46-d45697dbf0a6" class="ListItem ListItem--disableGutters ListItem--divider">

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    基因表达在相容(c) - 般的和自我不相容(Si)的处理期间变化。花粉管柑橘最大值“Banpeiyu”(一个) 和柑橘tamurana“Hyuganatsu”(B)经C-或si -样处理0-4 h后,利用实时荧光定量PCR分析基因在花粉管中的表达铜/锌超氧化物歧化酶Cu / Zn Sod),铁SOD.Fe Sod.),锰SOD.锰超氧化物歧化酶),过氧化氢酶),半胱氨酸蛋白酶CYP),l-galactose-1-phosphate磷酸酶GPP).数值为三个生物重复的平均值±sd在每个时间点(n= 3).不同的字母代表在5%水平上的显著差异,由Tukey多量程检验(ns=无意义的区别)。

  • Effect of 2-h compatible (C)-like or self-incompatible (SI)-like treatments on reactive oxygen species level in Citrus maxima<\/em> \u2018Banpeiyu\u2019 (A<\/strong>) and Citrus tamurana<\/em> \u2018Hyuganatsu\u2019 (B<\/strong>) pollen tubes; Scale bar = 200 μm.<\/p><\/caption>","header":"","imageUris":["/view/journals/jashs/140/4/full-339fig4.jpeg"],"id":"F4_0"}],"id":"F4"}" aria-selected="false" role="option" data-menu-item="list-id-1914d794-4bcb-4ed4-9c46-d45697dbf0a6" class="ListItem ListItem--disableGutters ListItem--divider">

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    2 h亲和(C)或自不亲和(SI)处理对紫花苜蓿活性氧水平的影响柑橘最大值“Banpeiyu”(一个) 和柑橘tamurana“Hyuganatsu”(B)花粉管;比例尺= 200 μm。

  • 伯努克,M。Timmers,T。Jauneau,一个。Briere,C。智慧,P.J.马可,y。淡淡,l2008RD19,拟南芥RRS需要半胱氨酸蛋白酶1-R介导的抗性,通过核重新定位到核Ralstonia solanacearum.PopP来说2效应植物细胞20.22522264

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